معیارهای لازم برای طراحی پرایمر DNA جهت انجام واکنش PCR.
نرمافزارهای آنلاین متداول که معمولاً برای طراحی پرایمر DNA استفاده میشوند.
نکاتی کلیدی برای عیبیابی نتایج الکتروفورز ژل.
واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)
در این بخش، موارد زیر را فرا خواهید گرفت:
مراحل درگیر در PCR (چرخه PCR): واسرشتگی (denaturation)، اتصال (annealing)، بسط (extension).
اجزای واکنش PCR: الگو DNA، DNA پلیمراز، dNTPs، پرایمر جلو (forward primer) و پرایمر معکوس (reverse primer).
برنامه تکثیر PCR.
تکثیر نمایی.
تفاوت اندازه بین محصولات تکثیر PCR در سیکلهای اول، دوم و سوم.
معیارهای طراحی پرایمر PCR
در این بخش، شرح کاملی از معیارهای طراحی پرایمر PCR و چگونگی تأثیر آنها بر حساسیت و پایداری پرایمر را خواهید آموخت؛ از جمله: طول پرایمر، دمای ذوب پرایمر، دمای اتصال پرایمر، درصد GC پرایمر، GC-clamp، همولوژی متقاطع و ساختار ثانویه پرایمر.
ابزارها و روشها
در این بخش، چگونگی انجام موارد زیر را خواهید آموخت:
بازیابی توالی ژن از NCBI و تعیین موقعیت دقیق هر اگزون بر روی کروموزوم با استفاده از ابزارهای گرافیکی.
مقایسه رونویسیهای mRNA مختلف و انتخاب یکی برای ارزیابی بیان ژن در سلولهای جدید.
در این بخش، نکاتی برای الکتروفورز ژل موفقیتآمیز پیدا خواهید کرد. این مبحث شامل تمام مشکلات احتمالی است که ممکن است با آنها مواجه شوید و برای هر مشکل، راه حلی پیشنهاد میدهد.
سرفصل ها و درس ها
Polymerase Chain Reaction
مقدمه
Introduction
درس ۱. چرخه PCR
Lecture 1. PCR Cycling
درس ۲. برنامه تکثیر استاندارد + تکثیر نمایی
Lecture 2. Standard Amplification Program + Exponential Amplification
درس ۳. تفاوت اندازه بین محصولات تکثیر PCR اولیه
Lecture 3. The size difference between the PCR amplification products of the 1st
آزمون
Quiz
معیارهای طراحی پرایمر PCR
PCR Primer Design Criteria
درس ۴. فهرست معیارهای طراحی پرایمر PCR + دو منبع
Lecture 4. List of the PCR Primer Design Criteria + Two Resources
درس ۵. طول پرایمر DNA
Lecture 5. The DNA Primer Length
درس ۶. دمای ذوب پرایمر (Tm) - معادله والاس، معادله مارمور و دوتی
Lecture 6. Primer Melting Temperature (Tm)-Wallace equation, Marmmur & Doty equa
درس ۷. نحوه محاسبه آنتالپی، آنتروپی و انرژی آزاد
Lecture 7. How to Calculate Enthalpy, Entropy, and Free Energy
درس ۸. Tm پرایمر - روش نزدیکترین همسایه
Lecture 8. Primer Tm-The Nearest Neighbor Method
درس ۹. دمای اتصال (Ta) پرایمر DNA
Lecture 9. Annealing Temperature (Ta) of the DNA Primer
درس ۱۰. محتوای GC پرایمر DNA
Lecture 10. GC-Content of the DNA Primer
درس ۱۱. گیره GC در انتهای 3’ پرایمر DNA
Lecture 11. GC Clamp at the 3’ End of the DNA Primer
درس ۱۲. ساختار ثانویه پرایمر
Lecture 12. Primer Secondary Structure
درس ۱۳. رانها و تکرارها در پرایمر
Lecture 13. Runs & Repeats in the primer
درس ۱۴. همولوژی متقاطع
Lecture 14. Cross homology
درس ۱۵. طول محصول پرایمر
Lecture 15. Primer product length
آزمون - ۲
Quiz- 2
آزمون - ۳
Quiz- 3
ابزارها و روشها (نحوه...)
Tools and Methods (How to...)
درس ۱۶. بازیابی توالی یک ژن از NCBI و تعیین موقعیت دقیق
Lecture 16. Retrieve a Gene Sequence form NCBI, and Determine the Exact Location
درس ۱۷. مقایسه رونویسیهای mRNA مختلف و انتخاب یکی برای ارزیابی یک ژن
lecture 17. Compare Different mRNA Transcripts and Select One to Evaluate a Gene
درس ۱۸. درک تنظیمات Primer3 + امتیاز خود-مکمل بودن پرایمر
Lecture 18. Understand Primer3 Setting + Primer Self-complementrity score
درس ۱۹. محاسبه امتیاز خود-مکمل بودن پرایمر
Lecture 19. Calculate Primer Self-Complementarity Score
درس ۲۰. بررسی همولوژی متقاطع پرایمر با استفاده از BLAT
Lecture 20. Check for Primer Cross Homology Using BLAT
درس ۲۱. ارزیابی پرایمرها بر اساس دلتا G
Lecture 21. Evaluate Primers Depending on Delta G
عیبیابی الکتروفورز ژل
Gel Electrophoresis Troubleshooting
درس ۲۲. شدت پایین همه یا برخی باندهای DNA
Lecture 22. Low Intensity of All or Some DNA Bands
درس ۲۳. باندهای DNA لکهدار
Lecture 23. Smeared DNA Bands
نمایش نظرات